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Protocolo de ensayo indicador de luciferasa

La luz producida por las luciérnagas se ha convertido en una herramienta importante para los biólogos moleculares. Firefly bioluminiscencia - producido por la conversión de luciferasa luciferina a oxiluciferina - fue identificado por primera vez, que se caracteriza y se convirtió en el ensayo indicador de luciferasa por investigadores de la Universidad de California en San Diego, en 1986.

definiciones

El ácido desoxirribonucleico (DNA) sirve como el material genético en las células. Una secuencia promotora de ADN controla la expresión de un gen - una secuencia de ADN que produce una proteína específica. Como una pieza separada de ADN, un plásmido que contiene un gen, tal como luciferasa.

métodos

Un científico construye un plásmido que contiene un promotor y el gen de la luciferasa. Este plásmido se transfecta - introdujo biológicamente, químicamente o mecánicamente - en una célula animal, y más tarde de que celular rota abierta para liberar cualquier luciferasa producida. La luciferina se añade a esta mezcla de células, y se mide la cantidad de bio-luminiscencia producida por la conversión de la luciferasa de la luciferina a oxiluciferina. Kits y protocolos detallados están disponibles comercialmente para este ensayo.

Usos

La cantidad de bio-luminiscencia producida en este ensayo es proporcional a la fuerza del promotor, y por lo tanto sirve como un método útil para la comparación de diferentes promotores. Esto es importante en entornos industriales, como promotores optimizados podrían aumentar la cantidad de proteína producida en la misma cantidad de tiempo.