Protocolos CFSE

CFSE, o carboxifluoresceína succinimidil-éster, es una solución de tinción de células fluorescentes utilizados en los estudios de migración de linfocitos. Los linfocitos son las células blancas de la sangre que tienen la capacidad de moverse fuera de la corriente sanguínea para capturar microorganismos alienígenas, que juega un papel importante en la defensa inmunológica. CFSE también se puede utilizar para timocitos de etiquetas y las células embrionarias, de acuerdo con "Inmunología y Biología Celular".

Protocolo de tinción de linfocitos humanos

Los técnicos Preparar una suspensión celular con 20 millones de células por ml en 0,1 por ciento de suero fetal bovino (FBS) y solución salina tamponada con fosfato (PBS). Añaden CFSE y dejar reposar la suspensión durante ocho minutos, de acuerdo con la Universidad de Kansas Medical Center. A continuación se añade previamente calentada FBS y las células se incubaron en un baño de agua a 98,6 grados Fahrenheit durante 10 minutos. Las células se centrifugaron a continuación durante cinco minutos, el sobrenadante se desecha y las células se lavan en una solución de 2 por ciento FBS / PBS tres veces. Las células se fijaron con paraformaldehído.

Simplificada protocolo de tinción CFSE

Los técnicos centrifugue muestras de sangre, eliminando las células rojas. Más tarde, se lavan los linfocitos con PBS para eliminar la proteína libre. Para ser capaz de observar la división celular después de dos días, se añade CFSE en bajas concentraciones durante ocho minutos, a continuación, la reacción se bloquearon con suero de ternera fetal. Las células se lavaron dos veces con PBS / FCS. Este protocolo puede ser usado en los experimentos "in vivo" o "in vitro", según The Hedrick Laboratorio de la Universidad de California.

Protocolo para la activación de las células T CD8 Naive en Vitro

Una célula T naive es un linfocito que ha diferenciado en la médula ósea. Este tipo de células se considera maduro, y las células responden a nuevos patógenos que el sistema inmune nunca se ha encontrado. Los técnicos incuban virus de la gripe y de la célula muestras en hielo durante 30 minutos, se centrifuga y continúan el proceso de incubación durante 18 horas a 98,6 grados Fahrenheit. Posteriormente, las células se tiñeron con CFSE y los resultados son analizados bajo citometría de flujo.