Cómo controlar el crecimiento de la célula

Los científicos monitorear rutinariamente el crecimiento celular. Puede ser una parte de mantenimiento de la célula regular, o como parte de un experimento. Por ejemplo, un experimento podría ser configurado para comparar el impacto de tres fármacos diferentes en el crecimiento de las células. En este caso, cuatro frascos de células a la misma concentración se configuran; uno sin drogas como control, y uno para cada uno de los tres fármacos. Las células se retiraron de los frascos a intervalos regulares, como por ejemplo todos los días, se contaron y registraron. El número de células se trazan en un gráfico contra el tiempo; el impacto de los fármacos sobre el crecimiento celular puede ser comparado con el control.

Instrucciones

Células

1 células girar suavemente para obtener una suspensión uniforme. Retirar un volumen de células, tales como 1,0 mililitros (ml), con una pipeta y transferir a un tubo de ensayo. Diluir las células que dan 100.000 a 500.000 células por ml - esto debe proporcionar los aproximadamente 100 células requeridas para la significación estadística cuando se cuentan.

2 Diluir las células, si es necesario, mediante la adición de 9,0 ml de medio a los 1,0 ml de células. Mezclar y grabar la dilución. Si las células son todavía demasiado concentradas, retirar 1,0 ml de células diluidas a un tubo nuevo, añadir 9,0 ml de medio, mezclar y grabar la dilución. Las células de mamíferos crecen generalmente en el intervalo de 100.000 a 5.000.000 por ml, por lo 0 a 2 diluciones deben ser suficientes.

3 Mezclar las células de la dilución final. Retirar un pequeño volumen, como por ejemplo 0,1 ml, y colocar en un tubo nuevo. Añadir un volumen igual de azul de tripano, mezclar y grabar la dilución. Las células muertas ocupan azul tripán y azul aparecerá bajo el microscopio.

Contando

4 Pulir el hemocitómetro y cubreobjetos con papel para lentes, y el cubreobjetos en la parrilla hemocytameter. Añadir una gota de células diluidas a la forma en V junto a la rejilla. Las células se mueven bajo el cubreobjetos por acción capilar.

5 Colocar el portaobjetos en el microscopio, se centran en la red y utilizar contador de cuenta de la mano para contar las células viables, no azul,. Las células no deben superponerse; si es demasiado densa, realizar otra dilución. Si las células son demasiado diluida, preparar una muestra más concentrada.

6 Retire el hemocitómetro, limpio, vuelva a cargar, y contar de nuevo. Contar cada muestra de células tres veces.

Cálculo

7 Calcular el número de células por ml. La rejilla hemocitómetro está dividida en 9 cuadrados grandes, cada uno con un volumen de 0,1 ml.

8 Se divide el número de células contadas por el número de cuadrados grandes utilizado (nueve si se utiliza toda la red), y se multiplica por 10.000 para obtener células por ml. Multiplicar por el factor (s) de dilución para la concentración final.

9 Registrar la fecha, la muestra, los recuentos de células, factores de dilución y el número final de células por ml. Preparar un gráfico del número de células en función del tiempo para mostrar el crecimiento celular.